作者：王西成來(lái)源：INTERNET
細菌內毒素是微生物的一種代謝產(chǎn)物，能引起恒溫動(dòng)物和人體體溫異常升高，其中革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的內毒素致熱活性最強，很少劑量即能引起廣泛的生物效應及病理作用，嚴重時(shí)甚至危及生命。因此，加強其檢測便成為輸液制劑、市售輸液藥品、一次性注射器等面臨的重要課題，現將體會(huì )介紹如下。
1 檢測方法
一般最常用的是家兔發(fā)熱試驗法（RT）與鱟試驗法（LT）。RT為一種定性檢測內毒素的方法，應用歷史悠久，有很多限制，如家兔對內毒素反應上有個(gè)體差異，敏感度不高、耗時(shí)、不能定量檢測等。LT具有快速、簡(jiǎn)便、敏感度高、假陽(yáng)性少、試劑耗費少等優(yōu)良，可廣泛應用于注射劑的熱原控制，組液法對非內毒素引起的熱原則不敏感。
2 影響因素
2.1 試劑靈敏度由于鱟試劑靈敏度以能與之產(chǎn)生陽(yáng)性反應的內毒素的最低限度表示，靈敏度變化將使測定結果所反應的樣品中內毒素允許限度發(fā)生變化，所以應進(jìn)行靈敏度標化，特別是更換鱟試劑批號時(shí)，因為在LT操作過(guò)程中，各個(gè)實(shí)驗室條件之間必定有差異，標化時(shí)，應使用同一批號鱟試劑稀釋液，不宜用滅菌水取代。鱟試劑存放一定時(shí)間后（如半年），靈敏度有可能發(fā)生變化，也應進(jìn)行標化。文獻中曾有報道，因鱟試劑靈敏度實(shí)測值與標化值差異過(guò)大而引起同批檢測樣品截然相反的實(shí)驗結果。鱟試劑超過(guò)有效期，須進(jìn)行靈敏度考核，對于0.5ml/支，如陽(yáng)性管成立，證明其活性仍可使用，對于0.1ml/支即使陽(yáng)性管能成立，也不能使用，因為它是在不同安瓿中作對照。
2.2 干擾試驗是杜絕出現假陰性結果的有效且可行的措施。所有法定的藥物或樣品檢測均需在未稀釋或適當稀釋后測定，稀釋倍數不能超過(guò)最大有效稀釋后測定，稀釋倍數不能超過(guò)最大有效稀釋倍數，否則其中的內毒素經(jīng)稀釋后濃度過(guò)低而不被鱟試驗法檢測出。若供試品有干擾現象（抑制或增強），經(jīng)處理，仍未達到試驗要求的條件，則應服從家兔法，此時(shí)家兔法仍是檢測其中內毒素限量的適宜方法。另外，為提高鱟試驗法的準確性我們認為有無(wú)干擾物質(zhì)存在，均應同時(shí)做干擾試驗，以排除環(huán)境、操作、試劑、藥物等方面可能存在干擾鱟凝膠形成的因素，避免出現假結果，確保實(shí)驗可靠性。
2.3 反應靈敏度酸堿度是影響鱟試驗法反應靈敏度的一個(gè)重要因素，筆者根據多年的工作經(jīng)驗，認為在進(jìn)行鱟試驗法前，預先測定一下pH值，然后調至5.0～6.0為宜，另外，溫度在整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中也應恒定，否則檢測的靈敏度將顯著(zhù)下降，甚至反應被抑制，文獻中曾有多次報道。
2.4 操作加樣結束，應即放入恒溫水浴鍋中，因液態(tài)鱟試劑極不穩定，室溫放置時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )影響反應靈敏度，同時(shí)，供試品在恒溫水浴中應避免振動(dòng)，在反應尚未完成時(shí)不應取出試管，因為尚未完全形成的凝膠被破壞后不能被還原，容易出現假陰性。
3 結果判斷
鱟試驗法由于是以細菌內毒素激活其中凝集因子和凝聚酶，在試管中形成凝膠的一系列生化反應替代不了哺乳動(dòng)物自身熱反應的整個(gè)生理過(guò)程，因此，在中國藥典2000版中檢測方法由單一的凝膠法增加了定量檢測法，所以當用鱟試驗法測得結果為陰性時(shí)，可不再用家兔法作熱原試驗，組結果可疑時(shí)，須按規定重做一遍或用家兔法來(lái)復檢。
作者單位:235000安徽金蟾藥業(yè)集團有限公司