細菌內毒素檢查法（BET）是利用鱟試劑來(lái)檢測供試品中細菌內毒素的限量是否符合規定的一種方法，擁有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、專(zhuān)屬性強、試驗結果易判斷等優(yōu)點(diǎn)， 因而被廣泛應用于藥品、醫療器械、臨床醫學(xué)研究，各種水源、食品、動(dòng)物飼料等方面的體外內毒素檢查。BET的反應機理是一系列的酶促反應，任何影響反應機制因素的干擾，都會(huì )導致檢查結果的異常。特別是近些年生物醫藥的樣本組分越發(fā)復雜，對去除內毒素檢測干擾提出更大的挑戰。
廈門(mén)鱟生科·BIOENDO給大家整理了以下檢測樣本時(shí)可能產(chǎn)生干擾的因素都有哪些：
環(huán)境內毒素無(wú)處不在，操作環(huán)境及操作不當可使在操作過(guò)程中帶來(lái)污染，所用器具處理不當，被外來(lái)的內毒素污染，都很容易導致假陽(yáng)性結果。因此BET應在符合規定的凈化間或操作臺進(jìn)行，盡量防止外源性?xún)榷舅氐奈廴尽Ｋ闷鞑膽逑锤蓛簦盟帷A洗液或洗滌劑清洗后, 應反復沖洗干凈，避免殘留的內毒素。如玻璃容器須在250℃干熱滅活至少30min。采樣用注射器及吸管應有良好的精密度，玻璃容器材質(zhì)應選用耐酸、堿的硬質(zhì)玻璃，膠管、膠塞應使用優(yōu)質(zhì)醫用產(chǎn)品。實(shí)驗所接觸的器皿耗材均要無(wú)內毒素，以避免外源引入污染。操作人員在試驗過(guò)程中勿大聲講話(huà)和急速行動(dòng)，防止塵埃和唾液濺入檢品中。
供試品的種類(lèi)不同，對于BET的干擾因素不同，下面列舉了幾種常見(jiàn)的干擾因素及其解決方式。
二價(jià)陽(yáng)離子：二價(jià)陽(yáng)離子濃度不足(如Mg2+離子)，內毒素無(wú)法激活鱟試劑中的酶，反應被抑制。可通過(guò)使用鈣鎂離子添加劑（BY01）解決，注意過(guò)高的二價(jià)陽(yáng)離子（如Ca2+）濃度可能會(huì )對試驗帶來(lái)抑制作用。
高滲透壓：較高濃度的糖或鹽通常會(huì )抑制BET，可使用BET水在允許范圍內進(jìn)行稀釋消除干擾。
酶、酶抑制劑：供試品若含有絲氨酸蛋白酶會(huì )增強反應，若含有絲氨酸蛋白酶抑制劑會(huì )抑制反應。通常的消除干擾的方式為：使用BET水或廠(chǎng)家提供的樣本處理液（ST09）稀釋10倍，然后75℃加熱10分鐘，冷卻至室溫后再檢測。
非內毒素反應物：β-葡聚糖會(huì )造成實(shí)驗結果假陽(yáng)性，可使用G因子抑制劑（BT02）消除干擾。或使用內毒素檢測試驗進(jìn)行檢測。
洗滌劑：高濃度的洗滌劑會(huì )使鱟試劑的蛋白失活，可對供試品進(jìn)行稀釋降低干擾。
油脂類(lèi)：脂類(lèi)包裹內毒素，使內毒素無(wú)法暴露出來(lái)，實(shí)驗結果將出現假陰性，可通過(guò)添加分散劑（PBS50）的方式去除干擾。
一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內為宜，pH值過(guò)高或過(guò)低，均可抑制鱟試劑與內毒素的反應， 使鱟試劑靈敏度下降。可以通過(guò)酸堿緩沖液（BH02）調節供試品的pH值，使其處于最佳的pH范圍。
《中國藥典》規定鱟試驗反應溫度在37±1℃，凝膠法試驗需要注意溫育時(shí)間60±2min。溫度過(guò)低，凝膠化推遲，溫度過(guò)高則破壞鱟試劑，阻止凝膠反應；延長(cháng)溫育時(shí)間， 則提高了鱟試劑的靈敏度，易出現假陽(yáng)性。光度法、重組C因子熒光法、重組級聯(lián)試劑顯色法(RCR0428)需要注意檢測設備（鱟試驗微生物快速檢測系統ELx808IU-SN）溫控性能。
凝膠法試驗在溫育過(guò)程和取放安瓿時(shí)要小心避免振動(dòng)造成假陰性。
BET結果會(huì )受多種因素的干擾，造成結果異常。我們在實(shí)驗過(guò)程中，應按藥典規定的操作規程、實(shí)驗條件、廠(chǎng)家專(zhuān)業(yè)培訓指導，排除各種干擾因素，保證實(shí)驗結果準確可靠。
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